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產品簡介
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| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | GOY-01X0423 |
|---|---|---|---|
| 規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 | 供貨周期 | 現貨 |
| 主要用途 | 產品僅供科研使用 | 應用領域 | 化工 |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| RKO-AS45-1 (結腸癌轉基因細胞) | 1×10?cells/T25培養瓶 | GOY-01X0423 |
商品介紹：
名稱 RKO-AS45-1 (結腸癌轉基因細胞) 別稱RKO-AS-45-1; RKOAS451; RKO_AS45 種屬人類 年齡（性別）不詳 組織來源結腸癌，整合起動GADD45a表達載體的CMV啟動子 生長特性貼壁細胞 細胞形態上皮細胞樣 背景描述人的cDNA中編碼GADD45的開放閱讀框克隆到表達載體pCMV.3中，轉染結腸癌細胞RKO，建立了RKO-AS45-1細胞株。RKO-AS45-1細胞含有穩定整合巨細胞病毒(CMV)啟動子的表達載體，RKO-AS45-1細胞系和它的母系RKO一起可用于GADD45對DNA修復、凋亡和藥物敏感性研究。 生物安全等級2 [Cells Contain CMV viral sequences] 生長培養基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 基因表達情況p53+ (underexpressed) |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
ADIPOR2 基因全長ORF克隆
ARPC1A 基因全長ORF克隆
CLVS1 基因全長ORF克隆
PNMA1 基因全長ORF克隆
NTM 基因全長ORF克隆
KATNA1 基因全長ORF克隆
ST6GALNAC3 基因全長ORF克隆
NAPB 基因全長ORF克隆
TSPAN33 基因全長ORF克隆
CEBPE 基因全長ORF克隆
RKO-AS45-1 (結腸癌轉基因細胞) 1 管 JM109大腸桿菌 JM109 E.coli Strain -80℃保存
2 ug pRLuc-N2 pRLuc-N2 低溫運輸，-20℃保存
100mL 病毒沉淀劑 Virus Precipitation Reagent 4℃保存
2 ug pcDNA3.1/V6-His B pcDNA3.1/V6-His B 低溫運輸，-20℃保存
0.1%呂氏堿性美藍染色液 5ml*6支/盒
1g 次甲基綠 Methyl Green B 常溫干燥保存
50T 牛副流感病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
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