產品簡介

NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒微量法的相關產品：二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒微量法二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒可見分光光度法非蛋白質巰基測試盒微量法非蛋白質巰基測試盒可見分光光度法輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

商品屬性：

測定意義：

MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，線粒體中MDH是TCA循環的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統、活性氧代謝和抗病性等。根據不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細胞中，NAD-MDH分布于細胞質和線粒體中。
測定原理：
NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 

試劑的組成和配制：

試劑一、提取液 100 mL×1 瓶，在 4℃保存；

試劑二、液體 20 mL×1 瓶，在 4℃保存；

試劑三、粉劑×1 瓶，-20℃保存；

組織樣本的前處理：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量

（104個）：試劑一體積（mL）為 1000~2000：1 的比例（建議 2000 萬細菌或細胞加入 1mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 340nm，蒸餾水調零。

2、檢測工作液的配制：用時在試劑三中加入 19mL 試劑二和 0.5mL 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。；

3、測定前將檢測工作液在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本和 195μL 工作液，混勻后立即記錄 340nm

處 20s 時的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2，計算 ΔA=A1-A2。

注意：若 A1-A2 大于 0.5，需將樣本用提取液稀釋，使 A1-A2 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。

計算公式中乘以相應稀釋倍數。

NAD-MDH 活力單位的計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）NAD-MDH 活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷V 樣÷T=6430×ΔA

2、組織、細菌或細胞中 NAD-MDH 活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷(V 樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T

=6430×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/104

cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109

]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA

V 反總：反應體系總體積，2×10-4

L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×103

L / mol /cm；d：

比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：

反應時間，1 min；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；2000：細胞或細菌

總數，2000 萬。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

1、血清（漿）NAD-MDH 活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷V 樣÷T=12860×ΔA

2、組織、細菌或細胞中 NAD-MDH 活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷(V 樣×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織中每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T

=12860×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/104

cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷（2000×V 樣÷V 樣總）÷T=6.43×ΔA

V 反總：反應體系總體積，2×10-4

L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×103

L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；

T：反應時間，1 min；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；2000：細胞或細菌總數，2000 萬。

生化檢測試劑盒實驗操作說明：

一、抗氧化系列生化檢測試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測、總抗氧化能力（TAC）檢測、植物原花青素(OPC)含量檢測、植物類黃酮含量檢測、植物總酚（TP）含量檢測試劑盒。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡單易用的比色分析法，用于測定各種樣品中的XO活性，特點是測定血清，血漿，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性，以及廣泛的檢測范圍：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化檢測試劑盒

包括*酶 (CAT) 活性分析、*（H2O2）檢測、脂質過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質羰基含量檢測、超氧陰離子含量檢測等試劑盒。

蛋白質羰基含量檢測試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡單易用的比色法，用于分析不同生物樣品（細胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點是：1.測定組織樣本、細胞、細菌、血清等中的蛋白質羰基含量。2.樣本處理、實驗步驟以及結果計算更加詳盡準確精煉。3.保質期長。

三、抗逆系列生化檢測試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例，提供一種簡單易用的比色測定法，用于定量測定血清，血漿，組織/細胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點是：1.測定血清，血漿，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測范圍：3.13- 200U/mL。

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