耗牛免疫球蛋白GELISA檢測試劑盒操作步驟

耗牛免疫球蛋白GELISA檢測試劑盒操作步驟:

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘。

LX-2, 人肝星形細胞株

3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞

C2C12, 小鼠肌原細胞

 細胞名稱

MCF-7（MCF7）（ATCC來源）, 人乳腺癌細胞

MDA-MB-231（ATCC來源）, 人乳腺癌細胞

Raji，人Burkitt's淋巴瘤細胞

Saos-2，人成骨肉瘤細胞

Caco-2，人結直腸腺癌細胞

NCI-N87 [N87]人胃癌細胞

MGC80-3（MGC-803）人胃癌細胞

EC109，人食管癌細胞

HGC-27人胃癌細胞

AGS人胃腺癌細胞

U251人膠質瘤細胞

THP-1人單核白血病細胞

HuH-7人肝癌細胞

SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細胞

A549, 人肺癌細胞系

SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株

A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株

SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞

WM35, 人黑色素瘤細胞

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株

U-2 OS, 人骨肉瘤細胞

WM451, 人黑色素瘤細胞

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞

C6, 大鼠腦膠質瘤細胞

UM-UC-3, 人膀胱移行細胞癌

Hela, 人宮頸癌細胞系

HNE2, 人鼻咽癌細胞系

SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細胞系

786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞

HEC-1A, 人子宮內膜癌細胞系

Caki-1, 人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞